Národopisná expozice se po rozsáhlé rekonstrukci znovu otevřela návštěvníkům na konci roku 2025, a to v nové moderní podobě. Představuje život obyvatel Humpolce a Humpoleckého Zálesí v 19. století. Návštěvníky zavede od vlakového nádraží, připomínajícího přivedení dráhy do města, do světa venkovských chalup, tradičních řemesel, soukenictví i noblesních měšťanských pokojů. Atmosféru expozice dotvářejí autentické zvuky z okolních vesnic, velkoformátové historické fotografie i animovaný film o lnářství a soukenictví, kterým provází Vojta, kluk zálesácký – hrdina staré místní povídky. Na své si přijdou i děti, pro které je v expozici připravena hravá linka s úkoly a menší edukační prostor s dalšími aktivitami.
Antropologická expozice se po celkové rekonstrukci a modernizaci otevřela veřejnosti v roce 2019. Návštěvníci v ní uvidí například obří modely mozku, ucha či srdce, ze kterých lze vyjmout některé části, modely koster, šroubovici DNA nebo magnetickou skládačku chromozomů. Jednu malou kostru si mohou také sami složit. Dominantou expozice je socha pravěkého člověka v životní velikosti včetně modelu jeho kostry. Osahat si mohou také busty pravěkých lidí. K vidění jsou antropologická měřidla a velkým lákadlem je dotyková obrazovka, kde se po zadání váhy a výšky zobrazí hodnota BMI. Expozice je rozdělena do oddílů genetika, variabilita člověka, anatomie člověka, evoluce, antropologie živého člověka a paleopatologie. Následuje část věnovaná životu a dílu humpoleckého rodáka, antropologa dr. Aleše Hrdličky. Od svých 13 let žil v Americe, kde vystudoval lékařství a antropologii a celý život se věnoval výzkumu vývoje lidstva. Zabýval se také původem a životem indiánů, proto je součástí expozice i indiánská vesnička s řadou zajímavých předmětů.
Expozice loutek byla slavnostně otevřena v roce 2009. Vystaveno je v ní přibližně 60 loutek – 40 cm vysokých marionet. Návštěvníci si mohou prohlédnout deset pohádkových scén a ti nejmenší si pohrát s roztomilými maňásky. Expozice nabízí pohádkový zážitek pro děti i dospělé.
Expozice „Jak se žilo, jak se šilo“ byla otevřena v roce 2014. Přibližuje práci švadlen a ševců v domácím prostředí. Ukazuje interiér běžné domácnosti z poloviny minulého století, kde lidé nejen žili, ale zároveň provozovali své řemeslo. Zaujme sbírkou ševcovského nářadí, starobylých žehliček i kamínek na jejich nahřívání.